L'orifice du vagin est la portion la plus étroite. Au-dessous de la muqueuse, on constate la présence du constricteur du vagin. On y trouve aussi les bulbes du vagin, organes érectiles de la grosseur d'une amande, situés sur les côtés de l'ouverture vaginale et confondus au-dessous du clitoris par leur extrémité supérieure. L'ensemble de ces parties contractiles et érectiles forme une sorte d'anneau (anneau vulvaire). La surface intérieure du vagin, formée par la muqueuse, présente en avant une saillie antéro-postérieure (colonne antérieure du vagin), prenant naissance insensiblement en arrière et se terminant en avant sur le tubercule du méat urinaire.  Une colonne postérieure, analogue à l'antérieure, existe sur la paroi postérieure. De chaque colonne partent de petits plis transversaux, replis de la muqueuse recouverts de papilles très sensibles. Ces replis s'effacent avec l'âge.

La surface extérieure du vagin est en contact avec des organes divers. En avant, ce conduit est en rapport avec la vessie et l'urètre. L'adhérence entre le vagin et la vessie est solide, et il est difficile de séparer ces deux organes. Leur union forme la cloison vésico-vaginale, épaisse de 6 à 7 millimètres, à travers laquelle peuvent se produire des fistules, dites vésico-vaginales. Entre la paroi antérieure du vagin et la vessie, près de l'utérus, les uretères s'insinuent pour s'ouvrir dans la vessie, aux angles postérieurs du trigone vésical. L'urètre et la paroi antérieure du vagin sont confondus; leur union est si intime que l'urètre paraît creusé dans toute sa longueur dans la paroi vaginale.

En arrière, le vagin est en rapport, de haut en bas, avec le péritoine, le rectum et le périnée. Le péritoine recouvre le vagin dans une étendue qui peut varier de 1 à 3 centimètres. Au sommet du cul-de-sac de Douglas, le vagin est en rapport avec le rectum. Les parois réunies du vagin et du rectum constituent la cloison recto-vaginale, cloison de 4 à 5 millimètres d'épaisseur et de 3 à 4 centimètres de longueur. Le conduit vaginal offre une paroi antérieure et une postérieure. Cet organe a deux bords, droit et gauche. Les bords sont en rapport, en haut, avec la partie supérieure des ligaments larges, plus bas, avec les muscles releveurs de l'anus, et plus bas encore, avec les bulbes du vagin.

Les parois du vagin sont formées, principalement, par une épaisse couche de fibres musculaires lisses, revêtue d'une muqueuse à l'intérieur et d'une couche fibreuse à l'extérieur.

Couche musculeuse. - Cette couche est remarquable par sa couleur rouge. Elle est formée de fibres lisses entrecroisées dans tous les sens, mais on peut distinguer un plan de fibres longitudinales superficielles. Des fibres circulaires forment un plan entre le précédent et la muqueuse. Elles sont un peu plus épaisses vers l'ouverture du vagin et forment là une sorte de sphincter vaginal.

Couche muqueuse. - Elle a 4 millimètres d'épaisseur. Élastique et résistante, elle est formée de tissu conjonctif contenant beaucoup de fibres élastiques. Un épithélium pavimenteux stratifié, analogue à l'épiderme, forme la couche superficielle de la muqueuse.